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12月14日的直播中，普諾賽直播間為大家介紹了細胞黑點、細胞狀態變形、細胞空泡、聚團、脫落等常見問題，直播回放請至B站 -“普諾賽生物"進行觀看。本期直播答疑，從直播間提問中，篩選出部分有代表性的問題，做了詳細解答。如有其他問題，也歡迎大家在公眾號留言，我們將在線解答。
消化時間過長會損傷細胞嗎？
消化時間過長會導致細胞膜蛋白的改變，最直觀的表現就是消化后第二天漂浮細胞很多或者貼壁慢。
胰酶消化不掉的，二次消化對細胞損傷
小還是機械吹打對細胞損傷小？
建議二次消化。細胞與細胞間的連接沒有通過酶切開的話，用移液槍進行吹散后細胞會被撕裂，直接導致細胞不貼壁甚至死亡。
懸浮細胞聚團怎么處理？
懸浮細胞聚團，要分情況進行處理：
? 原本就是聚團生長的細胞，不用干預，比如NK-92等就是聚團生長；
? 如果是非聚團生長的細胞，比如THP-1聚團了，要區分高密度和低密度。高密度可以輕輕吹散細胞后進行低速離心，去除里面夾雜的死細胞，正常傳代即可改善；
? 非聚團生長的細胞低密度時，聚團一般是細胞狀態不太好，需要調整狀態。排查是否有污染以及培養環境合不合適等問題，對癥改善后細胞即可正常生長，聚團改善；
? 剛復蘇的懸浮細胞也會出現聚團，一般是靜置培養和少動，期間可以用補液和半換液的方式培養，等細胞密度長起來，生長至對數生長期時，團塊問題也會改善。
培養細胞系有很多無規則運動的小黑點，
培養基未渾濁、變黃，細胞生長速度不
變，形態變化不大。請問這是什么污染？
這個情況比較符合血清沉淀或者細胞碎片分泌物之類的，一般不用過于關注，細胞能夠茁壯生長就可以了。
豬肺泡巨噬細胞做實驗，一般可以傳多
少代以內？
如果是豬的肺組織提取的原代巨噬細胞，一般是終末分化的細胞，是不能增殖的，只能轉移到孔板做實驗。
要收集細胞分泌的蛋白時，培養基中加
不加FBS？應該怎么選擇？
一般要做分泌蛋白都是不建議加血清的。血清里面可能有一些蛋白類未知成分，不排除會和實驗的目標蛋白有反應或者類似，所以通常都是用的無血清。
提取的原代細胞不貼壁，怎么辦？
原代組織分離后體外培養通常會有類似的問題，需要選擇合適的包被試劑進行輔助貼壁，這是原代提取比較常見的操作。
如果對細胞的均勻度要求很高，有沒有
好的方法可以提高鋪板時細胞的分布勻度？
首先是細胞消化后盡量成單顆，鋪板的時候需要練習下手法，不要有旋渦產生，導致分布不均勻；除開鋪板手法外，細胞本身特性導致的容易聚團生長，可以嘗試包被培養瓶以后低密度接種細胞，可能會達到比較好的單層貼壁的情況。
消化時胰酶要預溫嗎？水浴鍋預溫可以嗎？
胰蛋白酶屬于酶制品，受溫度影響，反復的4℃- 37℃的溫度波動反而會導致酶失活，效果不好，所以不建議37℃復溫。4℃拿出來可以直接用，加入到細胞消化的時候放進培養箱就好了。
我養的上皮細胞消化下來有很多像葡萄串
一樣的細胞團，吹打也不能讓細胞分開。
這種情況一般還是消化不充分導致，建議可以適當延長消化時間，待細胞與細胞間的連接打開后再進行吹散，一般是很容易吹散的。
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