直播答疑 | 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境要求和監(jiān)測(cè)方法

在正常情況（未出現(xiàn)污染）下，培養(yǎng)箱的水盤(pán)應(yīng)使用75%酒精擦拭消毒，然后加入無(wú)菌水并添加適量的抑菌劑。當(dāng)培養(yǎng)箱出現(xiàn)污染時(shí)，可以使用新潔爾滅消毒液或3%的過(guò)氧化氫消毒液對(duì)水盤(pán)進(jìn)行消毒，消毒時(shí)間為30 min。此外，也可以使用紫外燈進(jìn)行消毒處理，消毒完成后用無(wú)菌水擦拭干凈，添加無(wú)菌水和抑菌劑后正常使用。

培養(yǎng)箱內(nèi)的HEPA過(guò)濾器一般不需要單獨(dú)清潔，當(dāng)使用出現(xiàn)異常時(shí)可以進(jìn)行更換（需要專業(yè)維修人員更換）。對(duì)于超凈工作臺(tái)和生物安全柜中的過(guò)濾器，只需根據(jù)實(shí)際使用情況，定期（半年至一年）更換初效濾網(wǎng)即可。

使用消毒液消毒，時(shí)間30 min左右即可；若使用的消毒液存在腐蝕性，應(yīng)在消毒完成后使用無(wú)菌水將消毒液擦拭干凈。使用臭氧或紫外燈的消毒時(shí)間一般也是30 min。

如果需要檢測(cè)泄漏至空氣中的CO₂濃度，防止其濃度過(guò)高可能引發(fā)的窒息風(fēng)險(xiǎn)，可以使用專門(mén)的CO₂濃度檢測(cè)儀，或者使用氧氣濃度監(jiān)測(cè)儀（適用于多種氣體環(huán)境，如含CO₂或氮?dú)獾模?/p>

如果是要檢測(cè)管道泄漏的位置，初步的檢查方法可以是使用肥皂水在管道的接頭位置進(jìn)行涂抹，觀察是否出現(xiàn)氣泡；如需要準(zhǔn)確檢測(cè)，則需專業(yè)人員使用專業(yè)檢測(cè)工具進(jìn)行檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)服在清洗完成之后，可以放在專用的滅菌袋中，再放進(jìn)高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌處理。滅菌完成后，將實(shí)驗(yàn)服連同滅菌袋一起放入烘箱中烘干備用。

臭氧消毒適用于配套有新風(fēng)系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室。臭氧一般需要通過(guò)新風(fēng)系統(tǒng)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室空間，并在空間內(nèi)達(dá)到一定濃度才能起到較好的消毒效果。消毒完成之后，也需要通過(guò)新風(fēng)系統(tǒng)將殘留的臭氧排出實(shí)驗(yàn)室，否則會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境產(chǎn)生影響。

細(xì)胞狀態(tài)不好的因素有很多，首要且關(guān)鍵的一步是排除污染因素。如果通過(guò)各種檢測(cè)手段（細(xì)菌、真菌通過(guò)瓊脂板或空培檢測(cè)，支原體使用試劑盒檢測(cè)）都無(wú)法檢測(cè)到污染，則可能不是因污染導(dǎo)致的。

如果仍懷疑存在污染，可以嘗試向培養(yǎng)物中添加適當(dāng)濃度的廣譜抗生素。如果添加抗生素后細(xì)胞狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn)，說(shuō)明確實(shí)存在某種難以檢測(cè)的微生物影響細(xì)胞狀態(tài)；如果添加抗生素后細(xì)胞狀態(tài)未出現(xiàn)好轉(zhuǎn)甚至更差，則需從其他方面排查細(xì)胞狀態(tài)不好的原因，如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件、細(xì)胞特性或外部操作因素等。