小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞要如何提取？

　　小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞一般采用長骨解剖和骨髓分離的程序。總體目標(biāo)是快速、系統(tǒng)地取出長骨，收集骨髓細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的實驗分析。該方法有助于回答有關(guān)骨髓生物學(xué)、腫瘤轉(zhuǎn)移和免疫學(xué)的關(guān)鍵問題。這種技術(shù)的主要優(yōu)點是解剖過程快速且標(biāo)準(zhǔn)化，骨髓分離過程相當(dāng)無菌。首先，將小鼠殺死并置于仰臥位。

　　然后將小鼠的四個爪墊固定在踝關(guān)節(jié)下方，用70%乙醇噴灑小鼠并*清洗腿部。接下來，在臀部正上方的下腹部中線右側(cè)做一個小切口，將切口向下延伸至腿部并穿過腳踝，拉回皮膚。

　　然后將固定在股骨近端的股四頭肌切開，露出腿骨前部，用銷釘將腿上的肌肉與板成45度角固定。將剪刀壓在股骨后部，從膝關(guān)節(jié)剪下腘繩肌。然后將固定在股骨近端的皮膚和腘繩肌向后拉，露出骨后部，用固定銷45度角從腿上固定腘繩肌。

　　用鑷子抓住股骨遠(yuǎn)端，就在膝關(guān)節(jié)上方。然后將股骨干兩側(cè)的剪刀刀片導(dǎo)向髖關(guān)節(jié)。到達(dá)股骨頭后，扭動剪刀，將頂部刀片直接移動到股骨頭上方，使股骨脫臼。

　　用鑷子抓住股骨干的頂部，從股骨頭上切下軟組織，將股骨從髖臼中取出。然后將包括股骨、膝蓋和脛骨在內(nèi)的整個腿骨從身體上拉出來，小心地切斷連接腿和皮膚的結(jié)締組織和肌肉。腳踝的結(jié)締組織被剪刀扭曲脫位后。

　　抓住脛骨遠(yuǎn)端，注意不要割傷肌腱，將脛骨向上拉離身體和指甲板。然后去除膝蓋長骨上殘留的任何結(jié)締組織以及附著在股骨和脛骨上的任何肌肉或結(jié)締組織。抓住股骨，髕骨朝外，股骨頭朝下。

　　過度拉伸膝蓋并扭轉(zhuǎn)剪刀以使脛骨和股骨脫臼。然后去除連接股骨和脛骨的所有結(jié)締組織。接下來，握住股骨，正面朝外，股骨頭向下，然后將剪刀沿股骨干向上引導(dǎo)至髁。

　　輕輕地來回轉(zhuǎn)動剪刀，去除髁突、髕骨和骨骺，露出干骺端。然后，用鑷子、剪刀和低塵擦拭紙去除附著在股骨上的任何肌肉或結(jié)締組織。接下來，抓住脛骨，正面朝外，腳踝端朝下。

　　如果脛骨骨骺完好，將剪刀沿脛骨軸向上引至髁突，輕輕來回轉(zhuǎn)動剪刀，將髁突和骨骺取出，露出脛骨干骨骺。然后移除附著在脛骨上的任何肌肉或結(jié)締組織，如圖所示。要獲得骨髓，首先將一根18號針頭穿過0.5ml微量離心管的底部。

　　然后將長骨放入管中，膝蓋向下，蓋住。將0.5ml微量離心管放入1.5ml微量離心管中，在大于等于10000倍g的微量離心管中離心15秒。目視檢查證實骨髓已從骨頭中分離出來小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。